麻花传剧MV在线看

以下是详细的操作方法、注意事项和故障排查指南。重要安全声明：

操作前务必阅读并理解伯乐提供的用户手册。

电转仪工作时会产生高压电，务必遵守安全规程，防止触电。

操作时需佩戴个人防护装备（笔笔贰），如手套和护目镜。

一、伯乐1652100电穿孔仪操作前准备

1、设备与耗材：

MicroPulser 电转仪主机

电转杯（Electroporation Cuvette），常用规格为 0.1 cm 或 0.2 cm 极间距。务必使用一次性电转杯，且不能重复使用。

预冷的无菌离心管（如 1.5 mL）

预冷的复苏培养基（如 SOC 或 LB 培养基）

预冷的无菌水或甘油水（用于洗涤细胞）

待转化的 DNA（通常为质粒、连接产物等）。DNA 应溶于 低离子强度缓冲液（如 TE 或水） 中，高盐分会导致电弧放电（打火），杀死细胞。

2、感受态细胞制备：

细胞需要被制备成电击感受态细胞。这与化学感受态细胞的制备方法不同，通常需要多次洗涤以去除离子。

细胞应在冰上保持低温，操作过程应迅速，以维持细胞的高效率。

二、伯乐1652100电转仪标准操作步骤（以大肠杆菌为例）

1、开机预热：

连接电源，打开仪器背面的开关。仪器会进行自检，显示屏亮起。

根据需要，通过面板上的按钮选择相应的程序。对于见的大肠杆菌，通常选择模式 "Ec1" （E. coli 1）。其他模式（如 Ec2, Yeast, Bact）用于其他特定细胞类型。

2、准备细胞-DNA 混合液：

从 -80°C 冰箱中取出一管电击感受态细胞，立即置于冰上让其缓慢解冻（或用手心捂几秒后立刻放回冰上）。

向预冷的无菌离心管中加入 1-100 ng 的 DNA（体积通常 < 5 µL）和 50-100 µL 的感受态细胞。

用移液器轻柔地混匀（避免产生气泡），并立即放回冰上。整个过程要快。

3、加样到电转杯：

取一个 0.1 cm 或 0.2 cm 的洁净电转杯，放在冰上预冷。

将细胞-DNA 混合液全部（或大部分）转移到电转杯的底部，确保液体位于两个电极之间，不要产生气泡。

擦干电转杯外壁的水分，防止电流短路。

4、电击：

将电转杯平稳地放入仪器样品室的金属槽中，确保与电极接触良好。

快速用力地关上样品室盖子。盖子会自动放电或需要手动按下按钮。

按下脉冲触发按钮（Pulse）。你会听到一声蜂鸣音，屏幕上可能显示实际的脉冲时间（约 4-5 ms）和电压。

5、复苏：

立即打开盖子，取出电转杯。

迅速向电转杯中加入 0.5 - 1 mL 预温（室温或37°C）的复苏培养基（如 SOC）。

用移液器轻轻吹吸数次，将细胞重悬并转移到一个无菌的离心管中。

将离心管置于 37°C 摇床中，150-225 rpm 复苏 45-90 分钟，让细胞恢复并表达抗生素抗性基因。

5、涂板筛选：

将复苏后的菌液适当稀释（或离心后重悬于少量培养基），涂布在含有相应抗生素的筛选平板上。

倒置平板，于 37°C 培养箱中培养 12-16 小时，观察转化子。

6、关机与清洁：

实验结束后，关闭电源。

用 70% 乙醇擦拭样品室，以防污染。

叁、成功关键总结：

1、低离子强度：细胞和顿狈础必须无盐。

2、低温操作：细胞始终在冰上。

3、迅速复苏：电击后立即加入培养基拯救细胞。

4、杜绝电弧：使用新电转杯、避免气泡、保持干燥。

如果严格按照上述步骤操作仍遇到问题，建议系统性地排查每个环节，并从制备新鲜、洗涤电击感受态细胞开始重试。