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Qubit荧光计使用特定的荧光染料,这些染料会选择性地与不同种类的核酸或蛋白结合。因此,您必须为您想要测量的物质选择对应的检测试剂盒(Assay Kit),每个试剂盒内都包含了预先配制好的标准品(Standards)。
核心答案:Qubit的“标准对照试剂"指的就是试剂盒中自带的两管浓度已知的标准品溶液(Standard #1 和 Standard #2),用于制作标准曲线。您不能混用不同试剂盒或不同检测类型的目标标准品。
一、常用的蚕耻产颈迟检测试剂盒与对应标准品
每个蚕耻产颈迟检测试剂盒通常包含:
基于荧光染料的定量工作液
标准品 #1 (浓度通常为 0 ng/mL)
标准品 #2 (浓度通常为 10 ng/μL 或 100 ng/μL,具体取决于试剂盒)
缓冲液
二、用于顿狈础定量
1、Qubit dsDNA HS Assay Kit (高灵敏度双链DNA检测试剂盒)
检测范围: 0.2 ng 至 100 ng
标准品 #1: 0 ng/mL
标准品 #2: 10 ng/μL (即10,000 ng/mL)
适用: 适用于低浓度样本,如下一代测序(NGS)文库、微量DNA提取物。
2、Qubit dsDNA BR Assay Kit (宽范围双链DNA检测试剂盒)
检测范围: 2 ng 至 1000 ng
标准品 #1: 0 ng/mL
标准品 #2: 100 ng/μL (即100,000 ng/mL)
适用: 适用于浓度较高的样本,如基因组DNA、PCR产物。
叁、用于搁狈础定量
1、Qubit RNA HS Assay Kit (高灵敏度RNA检测试剂盒)
检测范围: 5 pg 至 100 ng
标准品 #1: 0 ng/mL
标准品 #2: 10 ng/μL
适用: 总RNA、小RNA(如miRNA)的准确定量。
2、Qubit RNA BR Assay Kit (宽范围RNA检测试剂盒)
检测范围: 20 ng 至 1000 ng
标准品 #1: 0 ng/mL
标准品 #2: 100 ng/μL
四、用于蛋白定量
1、Qubit Protein Assay Kit (蛋白质检测试剂盒)
检测范围: 0.06 μg 至 5 μg
标准品 #1: 0 μg/mL
标准品 #2: 10 μg/μL (即10,000 μg/mL)
2、Qubit Protein BR Assay Kit (宽范围蛋白质检测试剂盒)
检测范围: 1 μg 至 50 μg
标准品 #1: 0 μg/mL
标准品 #2: 10 μg/μL
五、使用标准品的操作流程(以dsDNA HS为例)
1、准备工作液: 将荧光染料与缓冲液按一定比例混合。
2、制作标准曲线:
取两支Qubit专用试管,分别加入199 μL的工作液。
在第一管中加入 1 μL 的 Standard #1 (0 ng/μL)。
在第二管中加入 1 μL 的 Standard #2 (10 ng/μL)。 混合均匀。
这两管就是您的标准对照。
3、测量样品: 用同样的方法,将1 μL您的未知样本与199 μL工作液混合。
4、上机读数:
在Qubit荧光计上选择对应的检测程序(如dsDNA HS)。
仪器会首先提示测量两个标准品。完成后,仪器会自动生成一条标准曲线。
随后再测量您的样品管,仪器会根据标准曲线计算出样本的准确浓度。